使用LC3000液相色譜儀,千萬要注意這些
LC3000液相色譜儀,包括P3000平流高壓輸液泵,UV3000可變波長(zhǎng)紫外分光檢測(cè)器及T3000柱溫箱。該系統(tǒng)以大型精密儀器制造技術(shù)和先進(jìn)的儀器加工工藝為依托,為廣大用戶提供*性價(jià)比的分析儀器。
1.色譜柱的構(gòu)成
從LC3000液相色譜儀工作流程中看到,色譜柱是實(shí)現(xiàn)分離的核心部件,要求柱效高、柱容量大和性能穩(wěn)定。柱性能與柱結(jié)構(gòu)、填料特性、填充質(zhì)量和使用條件有關(guān)。
色譜填料:經(jīng)過制備處理后,用于填充色譜柱的物質(zhì)顆粒,通常是5-10粒徑的球形顆粒。
色譜柱管:內(nèi)部拋光的不銹鋼管。典型的液相色譜分析柱尺寸是內(nèi)徑4.6mm,長(zhǎng)250mm。
色譜柱:也稱固定相,是將色譜填料填充到色譜柱管中所構(gòu)成的,其結(jié)構(gòu)如圖8-8所示。
2.色譜柱的填充
干法填充:在硬臺(tái)面上鋪上軟墊,將空柱管上端打開垂直放在軟墊上,用漏斗每次灌入50-100mg填料,然后垂直臺(tái)面墩10-20次。
濕法填充:又稱淤漿填充法,使用專門的填充裝置。
LC3000液相色譜儀使用過程中有哪些關(guān)鍵因素要注意
使用后沒有及時(shí)清洗泵
流動(dòng)相不應(yīng)含有任何腐蝕性物質(zhì),含有緩沖液的流動(dòng)相不應(yīng)保留在泵內(nèi),尤其是在停泵過夜或更長(zhǎng)時(shí)間的情況下。如果將含緩沖液的流動(dòng)相留在泵內(nèi),由于蒸發(fā)或泄漏,甚至只是由于溶液的靜置,就可能析出鹽的微細(xì)晶體,這些晶體將和上述固體微粒一樣損壞密封環(huán)和柱塞等。因此,必須泵入純水將泵充分清洗后,再換成適合于色譜柱保存和有利于泵維護(hù)的溶劑(對(duì)于反相鍵合硅膠固定相,可以是甲醇或甲醇-水)。
流動(dòng)相走空
泵工作時(shí)要留心防止溶劑瓶?jī)?nèi)的流動(dòng)相被用完,否則空泵運(yùn)轉(zhuǎn)也會(huì)磨損柱塞、缸體或密封環(huán),zui終產(chǎn)生漏液。
沒有流動(dòng)相流出,又無壓力指示怎么辦?
可能是泵內(nèi)有大量氣體,這時(shí)可打開泄壓閥,使泵在較大流量(如5ml/min)下運(yùn)轉(zhuǎn),將氣泡排盡,也可用一個(gè)50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體。另一個(gè)可能原因是密封環(huán)磨損,需更換。
壓力和流量不穩(wěn)了?
原因可能是氣泡,需要排除;或者是單向閥內(nèi)有異物,可卸下單向閥,浸入丙酮內(nèi)超聲清洗。有時(shí)可能是砂濾棒內(nèi)有氣泡,或被鹽的微細(xì)晶?;蜃躺奈⑸锊糠侄氯?,這時(shí),可卸下砂濾棒浸入流動(dòng)相內(nèi)超聲除氣泡,或?qū)⑸盀V棒浸入稀酸(如4mol/L硝酸)內(nèi)迅速除去微生物,或?qū)Ⅺ}溶解,再立即清洗。
壓力為啥過高或過低?
可能是是管路被堵塞,需要清除和清洗。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏。檢查堵塞或泄漏時(shí)應(yīng)逐段進(jìn)行。
在進(jìn)行梯度洗脫時(shí),由于多種溶劑混合,而且組成不斷變化,因此帶來一些特殊問題,必須充分重視:
PS:(在液相色譜中對(duì)組分復(fù)雜的樣品采用梯度洗脫的方法。在同一個(gè)分析周期中,按一定程序不斷改變流動(dòng)相的濃度配比,稱為梯度洗脫。從而可以使一個(gè)復(fù)雜樣品中的性質(zhì)差異較大的組分能按各自適宜的容量因子k達(dá)到良好的分離目的。